小鼠稳态树突状细胞培养试剂盒
Mouse Steady-state Dendritic Cell Culture Kit
产品介绍：
小鼠稳态树突状细胞培养试剂盒（Catalog # CS-20001-100）是为在体外培养和诱导小鼠造血前体细胞向成熟树突状细胞（DC）亚群分化发育而专门设计的一款含血清培养基套装。该培养试剂盒可在10天内同时诱导不同DC亚群产生，主要包括传统型cDC2（CD11c+ MHCII+ CD11b+B220-）和浆细胞样pDC（CD11cmod MHCIIlow B220+PDCA1+），是研究不同亚群DC分化发育和功能、以及产生小鼠DC疫苗的重要培养系统。
小鼠稳态树突状细胞培养试剂盒包含100ml小鼠稳态树突状细胞基础培养基、1ml小鼠稳态树突状细胞补充因子和10ml预筛选的树突状细胞专用胎牛血清。基础培养基含有小鼠树突状细胞生长的基础营养成分，不含树突状细胞分化发育所需的细胞因子。补充因子包含小鼠稳态树突状细胞分化发育所需的所有细胞因子，以100X的储存液提供给用户。
产品信息：
产品名称 | Cat log # | 规格 | 储存条件 |
小鼠稳态树突状细胞培养试剂盒 | CS-20001-100 | 1 kit | |
小鼠稳态树突状细胞基础培养基 | CS-20001-B | 100ml | 4oC |
小鼠稳态树突状细胞补充因子 | CS-20001-S | 1ml | -20oC |
预筛选树突状细胞专用胎牛血清 | CS-DCF-10 | 10ml | -20oC |
完全培养基配制：
在无菌生物安全柜中，开展以下操作：
1.在4度冰箱解冻补充因子和胎牛血清，混匀后使用。
注：解冻后的补充因子和血清可放置于4 oC冰箱，在1个月内使用；或者分装至合适体积后，保存于-20oC冰箱，不可反复冻融！
2.将1体积的补充因子和10体积的血清加入到89体积的基础培养基中，充分混匀，得到小鼠稳态树突状细胞完全培养基。如取100ul补充因子和1ml血清加入至8.9ml基础培养基，以此类推。
注：配好的完全培养基请于4oC保存，且于1个月内使用完毕。
使用说明：
请详细阅读使用说明后再开始相关实验。
1.使用淋巴细胞分离液从小鼠骨髓总细胞中分离得到骨髓单个核细胞（BM-MNC），计数。
2.D0：使用完全培养基重悬BM-MNC，调整细胞密度至1.5*10^6/ml，按照如下表格所示将细胞铺于培养板：
培养板 | 完全培养基体积 | BM-MNC细胞数/孔 |
24孔板 | 1ml | 1.5*10^6 |
6孔板 | 4ml | 6*10^6 |
3.将培养板置于细胞培养箱，37 oC，5%CO2，静置培养。
4.D3：半量换液。小心从原来的培养板孔中取出一半原有培养基，加入等量新鲜完全培养基。
注：
完全培养基请恢复至室温后使用，减少对细胞的刺激；
考虑到培养过程中的液体挥发，加入新鲜完全培养基时，可考虑多加10%体积完全培养基。
5.D6：半量换液。同第4步。
6.D10：轻轻吹打细胞，收集悬浮细胞，即为分化成熟的小鼠稳态DC，可进行后续操作和分析。
注：如需研究特定刺激对DC的影响，可提前加入相应刺激，待D10收集细胞进行分析。
数据展示：
图：小鼠稳态树突状细胞亚群分布。取4-6周龄雄性C57BL/6小鼠BM-MNC按照上述说明培养至第10天，收集悬浮细胞检测DC产生和亚群分布。