小鼠CD11b+cDC2树突状细胞培养试剂盒

MouseCD11b+cDC2 Dendritic Cell Culture Kit

小鼠CD11b+cDC2树突状细胞培养试剂盒
小鼠CD11b+cDC2树突状细胞培养试剂盒
小鼠CD11b+cDC2树突状细胞培养试剂盒

小鼠CD11b+cDC2树突状细胞培养试剂盒(Catalog # CS-20002-100)是为在体外培养和诱导小鼠造血前体细胞向成熟CD11b+cDC2树突状细胞(DC)亚群分化发育而专门设计的一款含血清培养基套装。

规格: 1kit 0.35ml 0.65ml 10ml 100ml
   

              产品号:

              # CS-20002-100


             
产品介绍:
小鼠CD11b+cDC2树突状细胞培养试剂盒(Catalog # CS-20002-100)是为在体外培养和诱导小鼠造血前体细胞向成熟CD11b+cDC2树突状细胞(DC)亚群分化发育而专门设计的一款含血清培养基套装。该培养试剂盒可在10天内诱导cDC2(CD11c+ MHCII+ CD11b+CD8-)亚群产生,是研究cDC2分化发育和功能、以及产生小鼠DC疫苗的重要培养系统。
小鼠CD11b+cDC2树突状细胞培养试剂盒包含100ml小鼠CD11b+cDC2树突状细胞基础培养基、0.5ml小鼠CD11b+cDC2树突状细胞扩增补充因子、0.5ml小鼠CD11b+cDC2树突状细胞分化补充因子和10ml预筛选树突状细胞专用胎牛血清。基础培养基含有小鼠树突状细胞生长的基础营养成分,不含树突状细胞扩增、分化发育所需的细胞因子。扩增补充因子包含小鼠造血前体细胞扩增所需的所有细胞因子,分化补充因子包含小鼠CD11b+cDC2树突状细胞分化发育所需的所有细胞因子,二者均以100X的储存液提供给用户。

产品信息:

产品名称

Cat log #

规格

储存条件

小鼠CD11b+cDC2树突状细胞培养试剂盒

CS-20002-100

1 kit

小鼠CD11b+cDC2树突状细胞基础培养基

CS-20002-B

100ml

4oC

小鼠CD11b+cDC2树突状细胞扩增补充因子

CS-20002-EXS

0.35ml

-20oC

小鼠CD11b+cDC2树突状细胞分化补充因子

CS-20002-DES

0.65ml

-20oC

预筛选树突状细胞专用胎牛血清

CS-DCF-10

10ml

-20oC


其他本试剂盒未提供但需用的重要试剂和组分

小鼠c-kit+造血前体细胞磁珠分选试剂;


完全培养基配制
在无菌生物安全柜中,开展以下操作:

1.在4度冰箱解冻补充因子和胎牛血清,混匀后使用。

      注:解冻后的补充因子和血清可放置于4oC冰箱,在1个月内使用;或者分装至合适体积后,保存于-20oC冰箱,不可反复冻融!

2.

扩增培养基配制:将1体积的扩增补充因子和10体积的血清加入到89体积的基础培养基中,充分混匀,得到小鼠cDC2树突状细胞扩增培养基。如取100ul补充因子和1ml血清加入至8.9ml基础培养基,以此类推。

  分化培养基配制:将1体积的分化补充因子和10体积的血清加入到89体积的基础培养基中,充分混匀,得到小鼠cDC2树突状细胞分化培养基。
       注:配好的完全培养基请于4oC保存,且于1个月内使用完毕。


使用说明:

请详细阅读使用说明后再开始相关实验。

1.使用淋巴细胞分离液从小鼠骨髓总细胞中分离得到骨髓单个核细胞(BM-MNC),计数。
2.使用磁珠分选BM-MNC中c-kit+造血前体细胞(参考所使用试剂盒的说明书),计数。
注:一只小鼠骨髓中约含有1.5*10^6 c-kit+造血前体细胞,可根据需要调整进入分选的BM-MNC细胞量。
3.D0:使用扩增培养基重悬BM-MNC,调整细胞密度至2.5*10^4/ml,按照如下表格所示将细胞铺于培养板:
培养板
完全培养基体积
c-kit+造血前体细胞数/孔
24孔板
1ml
2.5*10^4
6孔板
4ml
1*10^5
4.将培养板置于细胞培养箱,37 oC,5%CO2,静置培养。
5.D3:扩孔。轻轻吹打孔内细胞及培养基,按照1:3将原孔内悬浮细胞平均分至3个新孔中,同时补加新鲜扩增培养基至初始培养体积(步骤3表格)。
注:完全培养基请恢复至室温后使用,减少对细胞的刺激;
6.D6:
1)扩孔:轻轻吹打孔内细胞及培养基,按照1:2将原孔内悬浮细胞平均分至2个新孔中;
2)诱导分化:在每个新孔内,补加等量分化培养基;
注:
由于培养过程中培养基的挥发造成体积损失,该步骤加入分化培养基时可按照24孔板每孔加入0.5ml6孔板每孔加入2ml分化培养基计算。
D6时培养板底会有一定量贴壁细胞出现,扩孔时请轻轻吹打细胞,只将悬浮细胞转移至新孔。贴壁细胞多为巨噬细胞,会影响最终DC纯度。
7.D8:
1)小心贴培养板侧壁用枪尖吸走1/2体积旧培养基;
2)转孔:轻轻吹打细胞,收集悬浮细胞,按照1:1将原孔内悬浮细胞转移至新孔中。补充新鲜分化培养基至初始体积(步骤3表格)。
8.D10:轻轻吹打细胞,收集悬浮细胞,即为分化成熟的小鼠cDC2,可进行后续操作和分析。
注:如需研究特定刺激对DC的影响,可提前加入相应刺激,待D10收集细胞进行分析。


数据展示:
 
图:小鼠CD11b+cDC2树突状细胞鉴定。取4-6周龄雄性C57BL/6小鼠按照上述说明培养CD11b+cDC2至第10天,收集悬浮细胞检测DC产生和亚群分布。