人中性粒细胞扩增试剂盒
Human Neutrophil Expansion Kit
产品介绍：
人中性粒细胞扩增试剂盒（Catalog # CS-20009-50）是为在体外培养和扩增人中性粒细胞而专门设计的一款含血清培养基套装。该试剂盒可在21天内诱导人CD34+造血干/前体细胞分化扩增为中性粒细胞，总扩增效率达400-600倍，是研究人中性粒细胞分化、扩增和功能、以及大量产生人中性粒细胞的重要培养系统。
人中性粒细胞扩增试剂盒包含50ml人中性粒细胞基础培养基、0.5ml人中性粒细胞扩增补充因子和5ml预筛选中性粒细胞专用胎牛血清。基础培养基含有人中性粒细胞生长的基础营养成分，不含人中性粒细胞扩增所需的细胞因子。扩增补充因子包含人中性粒细胞扩增所需的所有细胞因子，以100X的储存液提供给用户。
产品信息：
产品名称 | Catlog# | 规格 | 储存条件 |
人中性粒细胞扩增试剂盒 | CS-20009-50 | 1 kit | |
人中性粒细胞基础培养基 | CS-20009-B | 50ml | 4oC |
人中性粒细胞扩增补充因子 | CS-20009-EXS | 0.5ml | -20oC |
预筛选中性粒细胞专用胎牛血清 | CS-NF-5 | 5ml | -20oC |
其他本试剂盒未提供但需用的重要试剂和组分：
人CD34+细胞磁珠分选试剂；
人CD34+造血干/前体细胞扩增试剂盒（东岭生物，Catalog # CS-20008-50）
完全培养基配制：
在无菌生物安全柜中，开展以下操作：
1.在4度冰箱解冻补充因子和胎牛血清，混匀后使用。
注：解冻后的补充因子和血清可放置于4oC冰箱，在1个月内使用；或者分装至合适体积后，保存于-20oC冰箱，不可反复冻融！
2.扩增培养基配制：将1体积的扩增补充因子和10体积的血清加入到89体积的基础培养基中，充分混匀，得到人中性粒细胞扩增培养基。如取100ul补充因子和1ml血清加入至8.9ml基础培养基，以此类推。
注：配好的完全培养基请于4oC保存，且于1个月内使用完毕。
使用说明：
请详细阅读使用说明后再开始相关实验。
1.D0：使用磁珠分选人CD34+造血干/前体细胞（参考所使用试剂盒的说明书），计数。
注：G-CSF富集的健康供体每100ml外周血中约含有5*10^5CD34+造血干/前体细胞。
2.按照人CD34+造血干/前体细胞扩增试剂盒（东岭生物，Catalog # CS-20008-50）说明书配制人CD34+造血干/前体细胞扩增培养基，重悬细胞，调整细胞密度至2.5*10^4/ml，按照如下表格所示将细胞铺于培养板：
培养板 | 扩增培养基体积 | CD34+造血干/前体细胞数/孔 |
96孔板 | 0.2ml | 5*10^3 |
24孔板 | 1.0ml | 2.5*10^4 |
3.将培养板置于细胞培养箱，37 oC，5%CO2，静置培养。
4.D3：半量换液。小心贴培养板侧壁用枪尖吸走1/2体积旧培养基，补充加入新鲜人CD34+造血干/前体细胞扩增培养基至初始培养体积（步骤2表格）。
注：完全培养基请恢复至室温后使用，减少对细胞的刺激；
5.D6：收集细胞，离心，300g，5分钟。
6.使用人中性粒细胞扩增完全培养基重悬细胞，调整密度至5*10^5/ml，将细胞铺于合适培养容器中，于细胞培养箱，37oC，5%CO2，静置培养。
7.D7-D20：按照需求扩增培养人中性粒细胞，传代时细胞铺板密度维持在5*10^5/ml，保持培养过程中细胞培养密度低于2*10^6/ml.
8.D20：收集悬浮细胞，即为人中性粒细胞群体，可根据需求开展后续实验。
注：
扩增过程中，密切关注细胞扩增状态，如细胞密度过大可能造成细胞状态不可逆损伤及细胞碎片的增多；
D7-D20期间，平均3天传代一次，可根据细胞具体状态调整。
数据展示：
图：人中性粒细胞扩增培养鉴定。分选人CD34+造血干/前体细胞按照上述说明培养中性粒细胞，不同时间点收集细胞进行总细胞扩增分析，培养第20天时收集悬浮细胞进行表型鉴定及分析。