人T细胞活化扩增培养试剂盒
Human T Cell Activation & Expansion Kit
产品介绍：
人T细胞活化扩增培养试剂盒（Catalog # CS-20004-50）是为在体外活化和扩增人T细胞而专门设计的一款含血清培养基套装。该培养试剂盒可高效活化人幼稚CD4+T或CD8+T细胞，并且达到高效扩增的目的，是研究人T细胞分化和功能的重要培养系统。
人T细胞活化扩增培养试剂盒包含50ml人T细胞基础培养基、0.35ml人T细胞活化补充因子、0.4ml人T细胞扩增补充因子和5ml 预筛选T细胞专用胎牛血清。基础培养基含有人T细胞生长的基础营养成分，不含T细胞活化、扩增所需的细胞因子。活化补充因子包含人T细胞活化所需的所有因子，扩增补充因子包含人T细胞扩增所需的所有细胞因子，使用时按照说明书所示比例加入至培养基中。
产品信息：
产品名称 | Cat log # | 规格 | 储存条件 |
人T细胞活化扩增培养试剂盒 | CS-20004-50 | 1 kit | |
人T细胞基础培养基 | CS-20004-B | 50ml | 4oC |
人T细胞活化补充因子 | CS-20004-ATS | 0.35ml | 4oC |
人T细胞扩增补充因子 | CS-20004-EXS | 0.4ml | -20oC |
预筛选T细胞专用胎牛血清 | CS-TF-5 | 5ml | -20oC |
其他本试剂盒未提供但需用的重要试剂和组分：
人T细胞磁珠分选试剂；
完全培养基配制：
在无菌生物安全柜中，开展以下操作：
1.在4度冰箱解冻补充因子和胎牛血清，混匀后使用。
注：解冻后的补充因子和血清可放置于4oC冰箱，在1个月内使用；或者分装至合适体积后，保存于-20oC冰箱，不可反复冻融！
2.活化培养基配制：将1体积的活化补充因子和4体积的胎牛血清加入到35体积的基础培养基中，充分混匀，得到人T细胞活化培养基。如取100ul补充因子和400ul胎牛血清加入至3.5ml基础培养基，以此类推。
扩增培养基配制：将1体积的成熟补充因子和10体积的胎牛血清加入到89体积的基础培养基中，充分混匀，得到人T细胞扩增培养基。如取100ul补充因子和1ml胎牛血清加入至8.9ml基础培养基，以此类推。
注：配好的完全培养基请于4 oC保存，且于1个月内使用完毕。
使用说明：
请详细阅读使用说明后再开始相关实验。
1.使用磁珠分选人外周血单个核细胞中T细胞（参考所使用试剂盒的说明书），计数。
注：健康供体每1ml外周血中约含有5-10*10^5 T细胞。
2.D0：使用活化培养基重悬T细胞，调整细胞密度至1*10^6/ml，按照如下表格所示将细胞铺于培养板：
培养板 | 完全培养基体积 | T细胞数/孔 |
96孔板 | 0.2ml | 0.2*10^6 |
24孔板 | 1.0ml | 1.0*10^6 |
3.将培养板置于细胞培养箱，37oC，5%CO2，静置培养。
4.D2：补充1/4初始培养体积的新鲜活化培养基（参考步骤2表格）。
注：完全培养基请恢复至室温后使用，减少对细胞的刺激；
5.D3：扩孔。
1)收集细胞，离心去除活化培养基，使用扩增培养基重悬，计数；
2)调整细胞密度至5*10^5/ml，按照如下表格将细胞铺于培养板，继续扩增培养T细胞：
培养板 | 完全培养基体积 | T细胞数/孔 |
96孔板 | 0.2ml | 1*10^5 |
24孔板 | 1.0ml | 5*10^5 |
6.D5/ D7：细胞计数，按照步骤5所示进行细胞扩增，或收集细胞进行后续操作和分析。
数据展示：
图：人T细胞活化扩增培养鉴定。分选的人CD4+T细胞按照试剂盒说明活化后第三天，显微镜下观察克隆形成（A）；
分选的人CD4+T和CD8+T细胞按照试剂盒说明培养至图示天数，收集细胞计数计算扩增倍数（B）