人单核细胞诱导DC培养基
Human Monocyte-derived Dendritic Cell Kit
人单核细胞诱导DC培养基
人单核细胞诱导DC培养基(Catalog # CS-20003-100)是为在体外培养和诱导人单核细胞向成熟CD1c+cDC2树突状细胞(DC)亚群分化发育而专门设计的一款含血清培养基套装。
规格: 1kit 0.5ml 10ml 100ml
产品号:
# CS-20003-100
产品介绍:
人单核细胞诱导DC培养基(Catalog # CS-20003-100)是为在体外培养和诱导人单核细胞向成熟CD1c+cDC2树突状细胞(DC)亚群分化发育而专门设计的一款含血清培养基套装。该培养试剂盒可在7天内诱导人cDC2(CD11c+ HLA-DR+ CD1c+CD14-)亚群产生,是研究人cDC2分化发育和功能、以及产生人DC疫苗的重要培养系统。
人单核细胞诱导DC培养基包含100ml人单核细胞诱导树突状细胞基础培养基、0.5ml人单核细胞诱导树突状细胞分化补充因子、0.5ml人单核细胞诱导树突状细胞成熟补充因子和10ml预筛选树突状细胞专用胎牛血清。基础培养基含有人树突状细胞生长的基础营养成分,不含树突状细胞分化、成熟所需的细胞因子。分化补充因子包含人单核细胞向CD1c+cDC2分化所需的所有细胞因子,成熟补充因子包含人CD1c+cDC2树突状细胞成熟所需的所有细胞因子,二者均以100X的储存液提供给用户。
产品信息:
产品名称 | Catlog# | 规格 | 储存条件 |
人单核细胞诱导树突状细胞培养试剂盒 | CS-20003-100 | 1 kit | |
人单核细胞诱导树突状细胞基础培养基 | CS-20003-B | 100ml | 4oC |
人单核细胞诱导树突状细胞分化补充因子 | CS-20003-DES | 0.5ml | -20oC |
人单核细胞诱导树突状细胞成熟补充因子 | CS-20003-MTS | 0.5ml | -20oC |
预筛选树突状细胞专用胎牛血清 | CS-DCF-10 | 10ml | -20oC |
其他本试剂盒未提供但需用的重要试剂:
人CD14+单核细胞磁珠分选试剂;
完全培养基配制:
在无菌生物安全柜中,开展以下操作:
1.在4度冰箱解冻补充因子和胎牛血清,混匀后使用。
注:解冻后的补充因子和血清可放置于4 oC冰箱,在1个月内使用;或者分装至合适体积后,保存于-20oC冰箱,不可反复冻融!
2.分化培养基配制:将1体积的分化补充因子和10体积的血清加入到89体积的基础培养基中,充分混匀,得到人cDC2树突状细胞分化培养基。如取100ul补充因子和1ml血清加入至8.9ml基础培养基,以此类推。
成熟培养基配制:将1体积的成熟补充因子和10体积的血清加入到89体积的基础培养基中,充分混匀,得到人cDC2树突状细胞成熟培养基。
注:配好的完全培养基请于4 oC保存,且于1个月内使用完毕。
使用说明:
人单核细胞诱导DC培养基(点击下载)
请详细阅读使用说明后再开始相关实验。
1.使用磁珠分选人外周血单个核细胞中单核细胞(参考所使用试剂盒的说明书),计数。
注:健康供体每1ml外周血中约含有1-3*10^5单核细胞。
2.D0:使用分化培养基重悬单核细胞,调整细胞密度至1*10^6/ml,按照如下表格所示将细胞铺于培养板:
培养板 | 完全培养基体积 | 单核细胞数/孔 |
24孔板 | 1.0ml | 1.0*10^6 |
6孔板 | 4.0ml | 4.0*10^6 |
3.将培养板置于细胞培养箱,37 oC,5%CO2,静置培养。
4.D3:半量换液。小心贴培养板侧壁用枪尖吸走1/2体积旧培养基,补充加入新鲜分化培养基至初始培养体积(步骤2表格)。
注:完全培养基请恢复至室温后使用,减少对细胞的刺激;
5.D5:诱导成熟。小心贴培养板侧壁用枪尖吸走1/2体积旧培养基,补充加入新鲜成熟培养基至初始培养体积(步骤2表格)。
6.D7:轻轻吹打细胞,收集悬浮细胞,即为分化成熟的人CD1c+cDC2,可进行后续操作和分析。
注:如需研究特定刺激对DC的影响,可提前加入相应刺激,待D7收集细胞进行分析。
数据展示:

图:人单核细胞诱导树突状细胞培养鉴定。磁珠分选的人单核细胞按照上述说明培养,至第6天时,加入100ng/ml LPS刺激,第7天收集悬浮细胞进行流式染色分析。