人单核细胞诱导DC培养基
Human Monocyte-derived Dendritic Cell Kit
产品介绍：
人单核细胞诱导DC培养基（Catalog # CS-20003-100）是为在体外培养和诱导人单核细胞向成熟CD1c+cDC2树突状细胞（DC）亚群分化发育而专门设计的一款含血清培养基套装。该培养试剂盒可在7天内诱导人cDC2（CD11c+ HLA-DR+ CD1c+CD14-）亚群产生，是研究人cDC2分化发育和功能、以及产生人DC疫苗的重要培养系统。
人单核细胞诱导DC培养基包含100ml人单核细胞诱导树突状细胞基础培养基、0.5ml人单核细胞诱导树突状细胞分化补充因子、0.5ml人单核细胞诱导树突状细胞成熟补充因子和10ml预筛选树突状细胞专用胎牛血清。基础培养基含有人树突状细胞生长的基础营养成分，不含树突状细胞分化、成熟所需的细胞因子。分化补充因子包含人单核细胞向CD1c+cDC2分化所需的所有细胞因子，成熟补充因子包含人CD1c+cDC2树突状细胞成熟所需的所有细胞因子，二者均以100X的储存液提供给用户。
产品信息：
产品名称 | Catlog# | 规格 | 储存条件 |
人单核细胞诱导树突状细胞培养试剂盒 | CS-20003-100 | 1 kit | |
人单核细胞诱导树突状细胞基础培养基 | CS-20003-B | 100ml | 4oC |
人单核细胞诱导树突状细胞分化补充因子 | CS-20003-DES | 0.5ml | -20oC |
人单核细胞诱导树突状细胞成熟补充因子 | CS-20003-MTS | 0.5ml | -20oC |
预筛选树突状细胞专用胎牛血清 | CS-DCF-10 | 10ml | -20oC |
其他本试剂盒未提供但需用的重要试剂：
人CD14+单核细胞磁珠分选试剂；
完全培养基配制：
在无菌生物安全柜中，开展以下操作：
1.在4度冰箱解冻补充因子和胎牛血清，混匀后使用。
注：解冻后的补充因子和血清可放置于4 oC冰箱，在1个月内使用；或者分装至合适体积后，保存于-20oC冰箱，不可反复冻融！
2.分化培养基配制：将1体积的分化补充因子和10体积的血清加入到89体积的基础培养基中，充分混匀，得到人cDC2树突状细胞分化培养基。如取100ul补充因子和1ml血清加入至8.9ml基础培养基，以此类推。
成熟培养基配制：将1体积的成熟补充因子和10体积的血清加入到89体积的基础培养基中，充分混匀，得到人cDC2树突状细胞成熟培养基。
注：配好的完全培养基请于4 oC保存，且于1个月内使用完毕。
使用说明：
人单核细胞诱导DC培养基（点击下载）
请详细阅读使用说明后再开始相关实验。
1.使用磁珠分选人外周血单个核细胞中单核细胞（参考所使用试剂盒的说明书），计数。
注：健康供体每1ml外周血中约含有1-3*10^5单核细胞。
2.D0：使用分化培养基重悬单核细胞，调整细胞密度至1*10^6/ml，按照如下表格所示将细胞铺于培养板：
培养板 | 完全培养基体积 | 单核细胞数/孔 |
24孔板 | 1.0ml | 1.0*10^6 |
6孔板 | 4.0ml | 4.0*10^6 |
3.将培养板置于细胞培养箱，37 oC，5%CO2，静置培养。
4.D3：半量换液。小心贴培养板侧壁用枪尖吸走1/2体积旧培养基，补充加入新鲜分化培养基至初始培养体积（步骤2表格）。
注：完全培养基请恢复至室温后使用，减少对细胞的刺激；
5.D5：诱导成熟。小心贴培养板侧壁用枪尖吸走1/2体积旧培养基，补充加入新鲜成熟培养基至初始培养体积（步骤2表格）。
6.D7：轻轻吹打细胞，收集悬浮细胞，即为分化成熟的人CD1c+cDC2，可进行后续操作和分析。
注：如需研究特定刺激对DC的影响，可提前加入相应刺激，待D7收集细胞进行分析。
数据展示：
图：人单核细胞诱导树突状细胞培养鉴定。磁珠分选的人单核细胞按照上述说明培养，至第6天时，加入100ng/ml LPS刺激，第7天收集悬浮细胞进行流式染色分析。