人CD34+造血干/前体细胞扩增试剂盒
Human CD34+ Hematopoietic Stem/Progenitor Cell Expansion Kit
产品介绍：
人CD34+造血干/前体细胞扩增试剂盒是为在体外培养和扩增人CD34+造血干/前体细胞而专门设计的一款含血清培养基套装。该试剂盒可在7天内诱导人CD34+造血干/前体细胞扩增达~10倍，是研究人CD34+造血干/前体细胞扩增和功能、以及产生人CD34+造血干/前体细胞的重要培养系统。
人CD34+造血干/前体细胞扩增试剂盒（Catalog # CS-20008-50）包含50ml人CD34+造血干/前体细胞基础培养基、0.5ml人CD34+造血干/前体细胞扩增补充因子和5ml预筛选造血干/前体细胞专用胎牛血清。基础培养基含有人CD34+造血干/前体细胞生长的基础营养成分，不含人CD34+造血干/前体细胞扩增所需的细胞因子。扩增补充因子包含人CD34+造血干/前体细胞扩增所需的所有细胞因子，以100X的储存液提供给用户。
产品信息：
产品名称 | Catlog# | 规格 | 储存条件 |
人CD34+造血干/前体细胞扩增试剂盒 | CS-20008-50 | 1 kit | |
人CD34+造血干/前体细胞基础培养基 | CS-20008-B | 50ml | 4oC |
人CD34+造血干/前体细胞扩增补充因子 | CS-20008-EXS | 0.5ml | -20oC |
预筛选造血干/前体细胞专用胎牛血清 | CS-HSCF-5 | 5ml | -20 oC |
其他本试剂盒未提供但需用的重要试剂和组分：
人CD34+细胞磁珠分选试剂；
MS5基质细胞；
丝裂霉素；
完全培养基配制：
在无菌生物安全柜中，开展以下操作：
1.在4度冰箱解冻补充因子和胎牛血清，混匀后使用。
注：解冻后的补充因子和血清可放置于4 oC冰箱，在1个月内使用；或者分装至合适体积后，保存于-20 oC冰箱，不可反复冻融！
2.扩增培养基配制：将1体积的扩增补充因子和10体积的血清加入到89体积的基础培养基中，充分混匀，得到人CD34+造血干/前体细胞扩增培养基。如取100ul补充因子和1ml血清加入至8.9ml基础培养基，以此类推。
注：配好的完全培养基请于4 oC保存，且于1个月内使用完毕。
使用说明：
请详细阅读使用说明后再开始相关实验。
1.D0：收集培养的MS5细胞，使用含10ng/ml丝裂霉素的培养基重悬细胞，调整细胞密度至＜1*10^7/ml，置于细胞培养箱中，37oC，5% CO2，孵育3小时。
2.使用20ml含有2.5%血清的PBS缓冲液彻底清洗MS5细胞，去除丝裂霉素。
3.重复步骤2.
4.使用MS5培养基重悬细胞，调整细胞密度为2.5*10^5/ml，按照如下表格铺于培养板，过夜培养使细胞贴壁：
培养板 | MS5培养基体积 | MS5细胞数/孔 |
96孔板 | 0.1ml | 2.5*10^4 |
24孔板 | 0.5ml | 1.25*10^5 |
5.D1：使用磁珠分选人CD34+造血干/前体细胞（参考所使用试剂盒的说明书），计数。
注：G-CSF富集的健康供体每100ml外周血中约含有5*10^5CD34+造血干/前体细胞。
6.使用扩增培养基重悬CD34+造血干/前体细胞，调整细胞密度至5*10^4/ml，按照如下表格所示将细胞铺于培养板（铺板之前去除MS5培养基）：
培养板 | 扩增培养基体积 | CD34+造血干/前体细胞数/孔 |
96孔板 | 0.2ml | 1.0*10^4 |
24孔板 | 1.0ml | 5.0*10^4 |
7.将培养板置于细胞培养箱，37 oC，5%CO2，静置培养。
8.D3：半量换液。小心贴培养板侧壁用枪尖吸走1/2体积旧培养基，补充加入新鲜扩增培养基至初始培养体积（步骤6表格）。
注：完全培养基请恢复至室温后使用，减少对细胞的刺激；
9.D6：半量换液，同步骤8.
10.D7：轻轻吹打细胞，收集悬浮细胞，即为扩增的人CD34+造血干/前体细胞，可进行后续操作和分析。
注：此步骤需轻柔吹打细胞，以免MS5基质细胞脱落。一般来说，MS5基质细胞贴壁牢固，轻柔吹打不会导致MS5脱落，操作人员可在显微镜下观察确认MS5脱落情况。
数据展示：
图：人CD34+造血干/前体细胞扩增鉴定。磁珠分选的人CD34+造血干/前体细胞按照上述说明培养7天后，进行表型鉴定及扩增倍数鉴定。