人CD34+造血干/前体细胞扩增试剂盒

Human CD34Hematopoietic Stem/Progenitor Cell Expansion Kit

人CD34+造血干 前体细胞扩增试剂盒
人CD34+造血干 前体细胞扩增试剂盒
人CD34+造血干/前体细胞扩增试剂盒

人CD34+造血干/前体细胞扩增试剂盒是为在体外培养和扩增人CD34+造血干/前体细胞而专门设计的一款含血清培养基套装。

规格: 1kit 0.5ml 5ml 50ml 
   

              产品号:

              # CS-20008-50


             
产品介绍:
人CD34+造血干/前体细胞扩增试剂盒是为在体外培养和扩增人CD34+造血干/前体细胞而专门设计的一款含血清培养基套装。该试剂盒可在7天内诱导人CD34+造血干/前体细胞扩增达~10倍,是研究人CD34+造血干/前体细胞扩增和功能、以及产生人CD34+造血干/前体细胞的重要培养系统。
人CD34+造血干/前体细胞扩增试剂盒(Catalog # CS-20008-50)包含50ml人CD34+造血干/前体细胞基础培养基、0.5ml人CD34+造血干/前体细胞扩增补充因子和5ml预筛选造血干/前体细胞专用胎牛血清。基础培养基含有人CD34+造血干/前体细胞生长的基础营养成分,不含人CD34+造血干/前体细胞扩增所需的细胞因子。扩增补充因子包含人CD34+造血干/前体细胞扩增所需的所有细胞因子,以100X的储存液提供给用户。

产品信息:
产品名称
Catlog#
规格
储存条件
人CD34+造血干/前体细胞扩增试剂盒
CS-20008-50
1 kit
人CD34+造血干/前体细胞基础培养基
CS-20008-B
50ml
4oC
人CD34+造血干/前体细胞扩增补充因子
CS-20008-EXS
0.5ml
-20oC
预筛选造血干/前体细胞专用胎牛血清
CS-HSCF-5
5ml
-20 oC

其他本试剂盒未提供但需用的重要试剂和组分
人CD34+细胞磁珠分选试剂;
MS5基质细胞;
丝裂霉素;

完全培养基配制
在无菌生物安全柜中,开展以下操作:
1.在4度冰箱解冻补充因子和胎牛血清,混匀后使用。
:解冻后的补充因子和血清可放置于4 oC冰箱,在1个月内使用;或者分装至合适体积后,保存于-20 oC冰箱,不可反复冻融
2.扩增培养基配制:将1体积的扩增补充因子和10体积的血清加入到89体积的基础培养基中,充分混匀,得到人CD34+造血干/前体细胞扩增培养基。如取100ul补充因子和1ml血清加入至8.9ml基础培养基,以此类推。
注:配好的完全培养基请于4 oC保存,且于1个月内使用完毕。

使用说明:

请详细阅读使用说明后再开始相关实验。
1.D0:收集培养的MS5细胞,使用含10ng/ml丝裂霉素的培养基重悬细胞,调整细胞密度至<1*10^7/ml,置于细胞培养箱中,37oC,5% CO2,孵育3小时。
2.使用20ml含有2.5%血清的PBS缓冲液彻底清洗MS5细胞,去除丝裂霉素。
3.重复步骤2.
4.使用MS5培养基重悬细胞,调整细胞密度为2.5*10^5/ml,按照如下表格铺于培养板,过夜培养使细胞贴壁:
培养板
MS5培养基体积
MS5细胞数/孔
96孔板
0.1ml
2.5*10^4
24孔板
0.5ml
1.25*10^5
5.D1:使用磁珠分选人CD34+造血干/前体细胞(参考所使用试剂盒的说明书),计数。
注:G-CSF富集的健康供体每100ml外周血中约含有5*10^5CD34+造血干/前体细胞。
6.使用扩增培养基重悬CD34+造血干/前体细胞,调整细胞密度至5*10^4/ml,按照如下表格所示将细胞铺于培养板(铺板之前去除MS5培养基):
培养板
扩增培养基体积
CD34+造血干/前体细胞数/孔
96孔板
0.2ml
1.0*10^4
24孔板
1.0ml
5.0*10^4
7.将培养板置于细胞培养箱,37 oC,5%CO2,静置培养。
8.D3:半量换液。小心贴培养板侧壁用枪尖吸走1/2体积旧培养基,补充加入新鲜扩增培养基至初始培养体积(步骤6表格)。
:完全培养基请恢复至室温后使用,减少对细胞的刺激
9.D6:半量换液,同步骤8.
10.D7:轻轻吹打细胞,收集悬浮细胞,即为扩增的人CD34+造血干/前体细胞,可进行后续操作和分析。
:此步骤需轻柔吹打细胞,以免MS5基质细胞脱落。一般来说,MS5基质细胞贴壁牢固,轻柔吹打不会导致MS5脱落,操作人员可在显微镜下观察确认MS5脱落情况

数据展示:

图:人CD34+造血干/前体细胞扩增鉴定。磁珠分选的人CD34+造血干/前体细胞按照上述说明培养7天后,进行表型鉴定及扩增倍数鉴定。